細胞爬片的操作方法及使用技巧!

　　在醫(yī)學生物研究中，免疫熒光檢測等需用到細胞爬片。現(xiàn)有的細胞爬片多采用表面平整、光滑的透明玻璃玻片。但在做免疫熒光檢測時，為了節(jié)約抗體，需免疫組化筆在爬片上進行范圍的圈定，將抗體加入劃定區(qū)域，免疫組化筆中的疏水成分阻滯抗體溢出所圈定的范圍，從而達到節(jié)約抗體的目的。細胞爬片是細胞培養(yǎng)中比較經(jīng)常會用到的，現(xiàn)將自己操作的一些方法與技巧拿與大家分享。

　　細胞爬片的特點:

　　1.玻片表面經(jīng)過TC處理，雙面均可使用。

　　2.γ射線滅菌，保證無菌。

　　3.使用便捷，只需打開包裝，將爬片放入孔板內(nèi)，將細胞懸液滴到爬片上即可培養(yǎng)。

　　4.爬片厚度為0.17mm，直徑為8mm/14mm/20mm/25mm.分別適用于48孔細胞培養(yǎng)板/24孔細胞培養(yǎng)板/12孔細胞培養(yǎng)板/6孔細胞培養(yǎng)板。

　　5.吸附：該玻片表面具有陽離子電荷，可以通過靜電作用吸附冰凍切片組織或細胞，使之粘附在玻片上，進而在玻璃和切片組織之間形成共價鍵.因此，無需粘黏劑或者蛋白包被，該玻片也能牢固的粘附切片或細胞。

　　爬片的準備:

　　1、爬片可用一般的蓋玻片，也可用專用爬片;

　　2、應用蓋玻片，可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小，以備置于6孔板、12孔板或24孔板;

　　3、將剪裁好的爬片，置于濃硫酸中浸泡并過夜，第二天先用自來水沖洗20遍，再用三蒸水沖洗3遍(個人認為主要目的是沖洗干凈就可以了)，放在飯盒或者培養(yǎng)皿(一定是玻璃的哦，要不然就……)中烘干后進行高壓消毒。

　　培養(yǎng)板的準備:

　　1、泡酸過夜

　　2、沖洗，烘干(1、2步驟與前大致相同)

　　3、放入超凈工作臺用紫外線照1～2小時就可以用了(在照之前可以將爬片一并放入，若細胞貼壁能力不強，可經(jīng)多聚賴氨酸浸片后放入。貼壁能力強的話，就可以省略了，進行紫外線消毒)

　　注：此步自己的經(jīng)驗是爬片可以先浸入消毒后的PBS內(nèi)，緊接著放入培養(yǎng)板內(nèi)。目的：浸過PBS的爬片依靠表面的液體，可以用培養(yǎng)板孔底貼和緊密，以利于細胞長到爬片上。(自己剛開始做的時候，經(jīng)常就是細胞全都長在了爬片與培養(yǎng)板之間，爬片上細胞罕見。)

　　細胞爬片:

　　1、胰酶消化細胞后計數(shù)

　　2、根據(jù)自己的需要選擇合適的細胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可

　　3、第二天即可進行干預措施

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