Elisa實(shí)驗(yàn)：雙抗夾心法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比

　　優(yōu)點(diǎn)：

　　雙抗夾心法：高靈敏、高專一性，抗原無須事先純化，孵育2次，操作簡單，減少人為因素的影響，可靠的特異性。

　　間接法：二抗可以加強(qiáng)信號(hào)，而且有多種選擇能做不同的測(cè)定分析。不加酶標(biāo)記的一級(jí)抗體則能保留它最多的免疫反應(yīng)性。

　　競(jìng)爭(zhēng)法：可適用比較不純的樣本，而且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。

　　競(jìng)爭(zhēng)法 此法可用于抗原及半抗原的定量測(cè)定，也可用于測(cè)定抗體。以測(cè)定抗原為例，將特異性抗體吸附于固相載體上，加入待測(cè)抗原和一定量的已知酶標(biāo)抗原，使二者競(jìng)爭(zhēng)地與固相抗體結(jié)合，經(jīng)過洗滌分離，zui后結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原與待測(cè)抗原含量呈負(fù)相關(guān)。

　　缺點(diǎn)：

　　雙抗夾心法：缺少鏈霉親和素的抗體，起不到型號(hào)放大作用，而且抗原一定得擁有兩個(gè)以上的抗體結(jié)合部位。

　　間接法：要經(jīng)過三次孵育，操作步驟繁瑣，稍微不注意會(huì)導(dǎo)致操作誤差，交互反應(yīng)發(fā)生的機(jī)率較高。間接法 此法是檢測(cè)抗體常用的方法。將已知抗原吸附于固相載體上，加入待測(cè)血清(抗體)與之結(jié)合，洗滌后，加酶標(biāo)抗體和底物進(jìn)行測(cè)定。

　　競(jìng)爭(zhēng)法：競(jìng)爭(zhēng)法對(duì)于手法要求非常高，整體的敏感性和專一性都較差。

　　雙抗體夾心法測(cè)抗原：雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原zui常用的方法，適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，但不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原，因其不能形成兩位點(diǎn)夾心。

　　雙抗原夾心法測(cè)抗體：反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測(cè)相應(yīng)的抗體。與間接法測(cè)抗體的不同之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋，可直接用于測(cè)定，因此其敏感度相對(duì)高于間接法。乙肝標(biāo)志物中抗HBs的檢測(cè)常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備，應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同，尋找合適的標(biāo)記方法。

　　間接法：是檢測(cè)抗體zui常用的方法，本法主要用于對(duì)病原體抗體的檢測(cè)而進(jìn)行傳染病的診斷。

　　競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體：當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時(shí)，可用此法檢測(cè)特異性抗體。其原理為標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競(jìng)爭(zhēng)與固相抗原結(jié)合?？笻Be的檢測(cè)一般采用此法。

　　競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原：小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定，可以采用競(jìng)爭(zhēng)法模式。其原理是標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合。標(biāo)本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少，后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測(cè)定多用此法。

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